丝虫病诊断标准及处理原则——附录A

来源:网络发布时间:2009-11-06
  病原学检查(补充件)
  A1 血液检查
  A1.1 厚血膜法
  A1.1.1 血片制作:于晚9时至翌晨2时,以酒精棉球消毒耳垂(或指端)待干,用三棱针快速深刺,轻挤出血液,取血3大滴,约等于60μL,置于已编号的清洁载玻片上,涂成边缘整齐、厚薄均匀的椭圆形或长方形厚血膜(约长3cm、宽1.5cm),平放于有盖的玻片盒内,以防落灰或虫吃。
  A1.1.2 血片染色:次日,将经自然干燥的血片放入清水中溶血5~10min,至血膜呈乳白色,取出晾干,甲醇固定,染色。大规模普查可用硼砂美蓝染色,鉴定虫种及保存宜用吉氏液或苏木素染色。
  A1.1.2.1 硼砂美蓝染色法:取美蓝2g,硼砂3g,置研钵内,边研边加水,待溶解后冲洗入瓶中,加蒸馏水100mL配成原液,过滤后放置备用。染色时取原液5mL加清水配成5%稀释液,染3~5min,使血膜呈天蓝色,然后用清水轻轻冲洗。本法染色前可不必先溶血、固定。
  A1.1.2.2 吉氏染色法:染液由吉氏粉0.5g,中性甘油25mL及甲醇25mL配成。先置染粉于研钵内,加少量甘油充分研磨,边研边加,至甘油加完为止,然后倾入100mL玻塞瓶内,用甲醇小量多次洗涤甘油染液倾入瓶内,塞紧瓶塞,充分摇匀,置于55~60℃温箱内24h或室温下3~5天,即为原液,放置愈久染色效果愈佳,临用时稀释。将溶血后已干的血片用甲醇固定约1min,然后滴加10%染液(原液加清水稀释配成)染45min,用蒸馏水轻轻冲洗。
  A1.1.2.3 德氏苏木素染色法;染液由A液即铵明矾饱和液(铵明钒20g、蒸馏水100mL);B液(苏木素结晶1g加纯酒精10mL);C液(甘油25mL加甲醇25mL)配成。将B液逐滴加入A液中,倒入一不盖紧的容器内,置于空气流通处,经2周至1个月使其充分氧化,过滤后加入C液,密封备用。血片溶血固定步骤同前。用上述染液染10~20min,用0.05%~0.1%稀盐酸脱色片刻,流水冲洗至血膜呈蓝色。
  A1.1.3 血片镜检:将染色的血片在低倍显微镜下顺序逐个视野检查微丝蚴并计数,根据微丝蚴的大小、体态、折光性、有无鞘膜、表皮是否光滑及内部结构等特征,予以识别。在高倍镜下观察微丝蚴的体核及头端空隙、神经环、排泄细胞、排泄孔、肛孔、尾核等结构。必要时需要用油镜作进一步鉴别。
  A1.2 微丝蚴浓集法
  A1.2.1 改良蒸馏水法:取静脉血1mL(取血时间同A1.1),置于盛有0.4mL3.8%枸椽酸钠的离心管内,混匀后加蒸馏水8~10mL,反复摇匀,待红细胞溶解后经每分钟3000转离心3~5min,倾去上液,加0.05mol/L氢氧化钠8~10mL,按住管口,用力振荡数次,放置5~10min,使纤维蛋白凝块迅速溶解,再离心,吸除上清液,将沉渣涂片,待干、染色、镜检。
  A1.2.2 微孔膜过滤法:将已编号的直径25mm、孔径5μm的微孔薄膜经蒸馏水漂洗后装入过滤器内,滤膜下垫一张同样大小经生理盐水润湿的滤纸。用注射器取静脉血1mL(取血时间同A1.1),加5%构椽酸钠0.1mL抗凝,吸入10%聚氧乙烯脂肪醇硫酸钠[或可用2%吐温80、0.1%碳酸氢钠或10%聚氧乙烯脂肪醉硫酸钠(ES)]溶液9mL,混匀后,去针头,直接插入过滤器,缓慢推动注射器,使已溶血的血液通过滤膜,以10mL生理盐水洗涤滤膜3次。开启过滤器,取出薄膜,自然晾干后,置热苏木素中染色5min,水洗,待干,镜检。
  A2 淋巴液、鞘膜积液、乳糜尿内微丝蚴的检查
  A2.1 淋巴液、鞘膜积液(或其他抽出液):直接涂片或用生理盐水稀释10倍离心后检查沉渣。液体蛋白含量高而呈胶状易凝者,加抗凝剂后检查。
  A2.2 乳糜尿(或乳糜积液):取乳糜尿4mL于试管中,加乙醚2mL,混合振摇,使乳糜中脂肪充分溶解,弃去上层脂肪,加水稀释10倍后离心检查。
  A3 活体组织检查
  A3.1 检查淋巴管、淋巴结内成虫:将手术取出的结节,用大头针固定于木板或软木板上,分离结节周围组织,仔细将病变的淋巴管壁切开,分离内容物,取出干酪样脓样物检查。如于结节出现2周以后切除、解剖,则管内脓样物可能已纤维化。脓样物内含大量巨噬细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞及夏雷晶体。将干酪样物或纤维组织移至玻片上,加数滴生理盐水,然后用解剖针将外层组织分离,即可见被包围的成虫。时间较久者发生粘连,虫体成碎段,不易将虫体与组织分离,则可用一针将包围的组织固定,另一针将虫体沿其长轴向一端轻移,或将组织移至盛有生理盐水的培养皿中,使虫体半浮,较易分离。但如结节形成较久,则不易取得完整的成虫。成虫或虫段可保存于甘油酒精(70%酒精95mL,甘油5mL)中供鉴定。
  A3.2 病理组织学检查:切下可疑的淋巴结、淋巴管结节或其他组织,用10%中性甲醛固定1~2天,移至70%酒精中作病理切片。在切片中除可发现丝虫成虫外,尚可见到嗜酸粒细胞、网状内皮细胞、淋巴细胞、浆细胞、纤维母细胞、异物巨细胞、肉芽肿、假结核、纤维组织增生、淋巴管周围炎、管腔内肉芽组织增生形成栓塞或息肉状阻塞管腔等病理变化。在切片中所见结构清楚的雌虫体内的微丝蚴体核清晰,所在淋巴管壁有少量浆细胞、淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润,而无纤维素沉积或肉芽肿形成者,则成虫可能为活虫。如虫体周围有较多的嗜酸粒细胞和散在的组织,虫体被炎细胞包绕形成肉芽肿,纤维化后形成纤维化结节,或结节内虫体已钙化,则均为死虫。如出现中性粒细胞浸润、渗出,内膜内皮细胞肿大、增生,则为继发性细菌感染。