GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
59.在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是 。
60.构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的 限制酶进行酶切。
61.经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第 泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。
62.将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的 与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行
培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。
正确答案
使细胞分散开
解析
在动物细胞培养技术中，使用胰蛋白酶可使细胞分散开
考查方向
解题思路
依据动物细胞培养技术作答。
易错点
本题不易出现错误。
正确答案
XhoI
解析
构建基因的表达载体时，一般是对行质粒和目的基因用同种限制酶进行酶切，才可连接。从图中可知质粒和目的基因上共有XhoI限制酶的切点。
考查方向
解题思路
构建基因的表达载体时，一般是对行质粒和目的基因用同种限制酶进行酶切，才可连接。
易错点
本题易在使用限制酶分析上不确定。
正确答案
解析
如图1所示三种连接产物上HpaI酶和BamHI酶切点的位置分别是，单个载体自连上只有Hpa I酶切点， GDNF基因与载体正向连接上HpaI酶和BamHI酶切点相距100+600=700bp,GDNF基因与载体反向连接上HpaI酶和BamHI酶切点相距100+100=200bp,因此酶切后的DNA片段进行电泳结果分别是1、2、3。
考查方向
解题思路
根据题意分析三种连接产物上HpaI酶和BamHI酶切点的位置，然后推断酶切后的片段，再对照电泳结果图作答。
易错点
本题易在对三种连接产物分析上出现错误。
正确答案
抗体 传代
解析
基因工程中目的蛋白是否产生的检测方法常用抗原抗体杂交法，也就是用相应的抗体与提取的蛋白质杂交，若有结合呈阳性反应，说明GDNF基因成功表达。动物细胞培养过程中细胞达到一定的密度时，出现生长抑制，需传代培养才能得到更多细胞。
考查方向
解题思路
依据基因工程中目的蛋白是否产生的检测方法及动物细胞培养时传代培养的技术作答。
易错点
本题易因高记住抗原抗体杂交检测法而出现错误。