[生物——选修3现代生物科技专题
虫草中的超氧化物歧化酶(PSSOD)具有抗衰老作用。研究人员培育了能合成PSSOD的转基因酵母菌。请结合下图回答问题:
注:Hind III和ApaL I是两种限制酶,箭头表示酶的切割位置。
23.将图中的重组DNA分子用Hind III和ApaL I完全酶切后,可得到 种DNA片段。图示的表达载体存在氨苄青霉素抗性基因,不能导人用于食品生产的酵母菌中,据图分析,可用 切除该抗性基因的部分片段使其失效,再用DNA连接酶使表达载体重新连接起来。
24.作为受体细胞的酵母菌缺失URA3基因,必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活,因此,图示表达载体上的URA3基因可作为 ,供鉴定和选择;为了筛选出成功导人表达载体的酵母菌,所使用的培养基 (填“需要”或“不需要”)添加尿嘧啶。
25.目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称为 。为了确定受体细胞中PSSOD基因是否转录,可用标记的 作探针进行分子杂交检测,分子杂交的原理是 。
26.利用蛋白质工程获得活性更高的PSSOD时,需根据所设计蛋白质的结构推测其
序列,最终确定相对应的脱氧核苷酸序列并经 获得所需的基因。
33.下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题:
(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用______两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过__________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒,需将其转入处于__________________态的大肠杆菌。
(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加__________,平板上长出的菌落,常用PCR鉴定,所用的引物组成为图2中_____________。
(3)若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接,连接部位的6个碱基对序列为 ,对于该部位,这两种酶 (填“都能”、“都不能”或“只有一种能”)切开。
(4)若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得 种大小不同的DNA片段。
62.GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图21所示),并导入到大鼠神经干细胞中,用于干细胞基因治疗的研究。请回答:
若要构建含GDNF基因的表达载体,则需选择图21中的 限制酶进行酶切。
63.GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图21所示),并导入到大鼠神经干细胞中,用于干细胞基因治疗的研究。请回答:
限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如下图表示四种质粒,其中,箭头所指部位为酶的识别位点,质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示GDNF基因运载体的是 。
(1)3 ApaL I
(2)标记基因(1分) 不需要
(3)转化(1分) PSSOD基因 碱基互补配对
(4)氨基酸(1分)
基因修饰(2分)【基因修饰或基因合成(2分),只答基因合成(1分)】