【生物——选修3：现代生物科技专题】
利用农杆菌转化法培育转基因植物是基因工程常采用的方法，请回答相关问题：
28.培育转基因植物过程的核心步骤是 ，其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以传给下一代，同时，使目的基因能够 和发挥作用。该阶段利用DNA连接酶连接被限制酶切开的 键。
29.组成基因表达载体的单体是 。基因表达载体中的启动子是 识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因转录。
30.用两种限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段。若利用该片段构建基因表达载体，应选用下图中的 Ti质粒？
31.将受体细胞培养成植株需要应用 技术，该技术的理论依据是 。
考察知识点
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33.下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：
（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用______两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过__________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于__________________态的大肠杆菌。
（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加__________，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中_____________。
（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位，这两种酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。
（4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得 种大小不同的DNA片段。
62．GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图21所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图21中的 限制酶进行酶切。
63．GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图21所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如下图表示四种质粒,其中,箭头所指部位为酶的识别位点,质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示GDNF基因运载体的是 。
正确答案
（1）构建基因表达载体 表达 磷酸二酯
解析
构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以通过复制遗传给下一代，同时，使目的基因表达和发挥作用；DNA连接酶的作用是在DNA片段之间形成磷酸二酯键。
考查方向
考查基因工程的操作工具。
解题思路
作为基因表达载体必须对宿主细胞无害，在受体细胞中稳定存在、复制和表达，同时可遗传给下一代。限制酶切断的是磷酸二酯键，DNA连接酶连接的是磷酸二酯键。
易错点
注意限制酶切断的是磷酸二酯键而不是氢键。
教师点评
掌握基因工程基本操作工具的各种作用是解题的关键，难度较易。
正确答案
（2）脱氧核苷酸 RNA聚合酶
解析
基因表达载体本质是DNA，DNA的基本组成单位是脱氧核苷酸；基因表达载体的构建是将目的基因插入启动子和终止子之间，在启动子上有RNA聚合酶结合位点，启动转录开始。
考查方向
考查运载体的本质及转录相关知识。
解题思路
基因表达载体本质是DNA，DNA的基本组成单位是脱氧核苷酸，启动子上有RNA聚合酶结合位点，启动转录开始。
易错点
注意基因载体构建中的目的基因插入启动子与终止子之间。
教师点评
掌握运载体的本质及基因表达载体构建的各部分作用是解题的关键，难度较易。
正确答案
（3）甲
解析
用两种限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段，所以应用限制酶XbaI和SacI，且必须把T－DNA片段破坏，使目的基因插入其中，所以用甲图处理最好。
考查方向
考查限制酶的作用。
解题思路
通常用相同的限制酶切目的基因和运载体，使其有相同的粘性未端。且把目的基因应插入T－DNA片段中。
易错点
注意用相同的限制酶处理，而不是用同一种酶处理。
教师点评
掌握基因表达载体构建的基本操作是解题关键，难度中等。
正确答案
（4）植物组织培养 (植物)细胞的全能性（1分）
解析
将离体的组织器官培育成完整植株用植物组织培养技术，是细胞的全能性。
考查方向
考查植物组织培养相关知识。
解题思路
将离体的组织器官培育成完整植株用植物组织培养技术，是细胞的全能性。
易错点
注意植物组织培养过程中的不同激素的配比。
教师点评
掌握植物组织培养过程及原理是解题关键。